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秦學(xué)¹，王維²，周建仁²，何州²

（1．聊城萬(wàn)合工業(yè)制造有限公司，山東 聊城252022；2.杭州華東醫(yī)藥集團(tuán)康潤(rùn)制藥有限公司，浙江 湖州313301）

1 引言

輔酶Q₁₀又名泛醌10，是一種脂溶性醌，其結(jié)構(gòu)類似于維生素K，因其母核六位上的側(cè)鏈——聚異戊烯基的聚合度為10而得名，是一種醌環(huán)類化合物^[1]。

分子式：C59H90O4

分子量：863.36

結(jié)構(gòu)式：

輔酶Q₁₀是人類生命不可缺少的重要元素之一，能激活人體細(xì)胞和細(xì)胞能量的營(yíng)養(yǎng)，具有提高人體免疫力、增強(qiáng)抗氧化、延緩衰老和增強(qiáng)人體活力等功能，醫(yī)學(xué)上廣泛用于心血管系統(tǒng)疾病^[2]。

制備型高效液相色譜（Prep-HPLC）作為一種高效的分離純化技術(shù)，具有單次分離時(shí)間短、易于操作、分離效率高等優(yōu)點(diǎn)，是天然產(chǎn)物、中草藥、生物活性物質(zhì)有效成分分離提純的核心設(shè)備^[3,4]。運(yùn)用該制備型高壓液相色譜系統(tǒng)進(jìn)行分離提取高純度的天然輔酶Q₁₀，具有分離效率高、節(jié)省溶劑等優(yōu)點(diǎn)。同時(shí)設(shè)備采用動(dòng)態(tài)軸向加壓技術(shù)裝填色譜柱，具有柱床穩(wěn)定性好、柱效高的特點(diǎn)，可用于該產(chǎn)品的批量連續(xù)性生產(chǎn)。

2制備實(shí)驗(yàn)

2.1儀器與試劑

聊城萬(wàn)合工業(yè)制造有限公司生產(chǎn)的制備型高壓高效液相色譜柱（63×630mm，含動(dòng)態(tài)加壓液壓站）；GLP3250制備型高壓輸液泵；UC-3292紫外-可見檢測(cè)器；以及Rheodyne3725i六通進(jìn)樣閥（配5ml定量環(huán)）、DM動(dòng)態(tài)混合器、色譜工作站軟件及電腦等。

填料選擇球形硅膠（富士硅化學(xué)有限公司）。

流動(dòng)相為正戊烷：丙酮（均為工業(yè)級(jí)，使用前先經(jīng)過(guò)蒸餾處理后用孔徑為0.45um的微孔濾膜過(guò)濾）。

說(shuō)明：實(shí)驗(yàn)所用到的流動(dòng)相（溶劑）以及樣品和實(shí)驗(yàn)室儀器（如溶劑過(guò)濾器、超聲波清洗器等）由杭州華東醫(yī)藥集團(tuán)康潤(rùn)制藥有限公司提供。

2.2樣品配制

抽取樣品溶液10-15ml經(jīng)針式濾膜過(guò)濾，舍棄初濾液，續(xù)濾液收集至潔凈容器中備用。

2.3制備色譜條件   

2.4制備過(guò)程

稱取800g硅膠加入2000ml正戊烷超聲、攪拌30min并脫氣，將攪拌好的硅膠懸濁液緩慢注入柱體內(nèi)，沉降120min，裝好柱頭密封元件，軸向加壓壓縮柱床至出液管無(wú)液體流出（裝柱壓力為1200psi，柱床高530mm）；

用進(jìn)樣針精密抽取樣品5ml，手動(dòng)注射進(jìn)樣；

按已設(shè)定流速進(jìn)行等度洗脫；

根據(jù)檢測(cè)器圖譜收集層析流出液。

2.5實(shí)驗(yàn)結(jié)果及討論

在上述色譜條件下，得到制備色譜圖如圖1所示：

將兩次單峰收集液分別濃縮至約50ml后取樣HPLC檢測(cè)

經(jīng)HPLC檢測(cè)，第一個(gè)峰保留時(shí)間為11.91min（與起始樣品雜質(zhì)保留時(shí)間（11.68）一致），歸一化面積百分比為92.80%；第二個(gè)峰保留時(shí)間為9.75min（與起始樣品Q₁₀保留時(shí)間（10.45）一致），歸一化面積百分比為94.81%。

3 結(jié)論

    本實(shí)驗(yàn)建立了制備型高效液相色譜法分離提取天然輔酶Q₁₀的實(shí)驗(yàn)條件，通過(guò)檢測(cè)分離結(jié)果發(fā)現(xiàn)，該制備型液相色譜系統(tǒng)滿足分離效果要求，同時(shí)操作方便，產(chǎn)品純度高，該設(shè)備和方法可用于天然輔酶Q₁₀的大量制備提取，另一方面，收集到的較高濃度的輔酶主要雜質(zhì)，也可供進(jìn)一步分析研究。

[參考文獻(xiàn)]

[1] Jones K，Hughes K，Mischley L，et al. Coenzyme Q₁₀ and cardiovascular health. Altern Ther Health Med，2004,10:22-30.

[2] 馬志科,昝林森,陳芳.輔酶Q₁₀制備技術(shù)及其在醫(yī)學(xué)中的應(yīng)用[J]. 動(dòng)物醫(yī)學(xué)進(jìn)展,2006,27(8):76-81.

[3] Hostettmann K，Marston A，Hostettmann M．Preparative Chromatography Techniques．Applications in Natural Product Isolation [J]．Plant Growth Regulation，1997，8 (4)：375—376.

[4] 王永祿，王麗瑤.制備型高效液相色譜法及其在中藥研究中的應(yīng)用[J].中醫(yī)藥通報(bào)，2006,5（3）：60-63.