本道AV无码一区二_92日韩国产精品无码视频_99热国产精品五月天_亚洲欧美视频一区二区三区

本文通過(guò)測(cè)定高效液相色譜硅膠柱柱效的實(shí)驗(yàn)結(jié)果，表明所用的化合物、流動(dòng)相、流動(dòng)相流速、溫度、進(jìn)樣量、進(jìn)...

      液相色譜法是溶于液態(tài)流動(dòng)相的各組分經(jīng)過(guò)固定相時(shí)，由于與固定相發(fā)生吸附、分離、離子吸引、排阻、親和等作用的大小、強(qiáng)弱不同，在固定相中滯留時(shí)間不同，從而先后從固定相中流出，達(dá)到將混合組分分離目的的方法。它的應(yīng)用，最早可追溯到20世紀(jì)初俄國(guó)植物學(xué)家茨維特（Tswett）利用碳酸鈣吸附作用分離植物色素[1]；液相色譜法開(kāi)始階段是用大直徑的玻璃管柱在室溫和常壓下用液位差輸送流動(dòng)相，稱為經(jīng)典液相色譜法。高效液相色譜法(HPLC)是在經(jīng)典液相色譜法的基礎(chǔ)上，改變色譜柱填料，填料顆粒小而均勻，小顆粒具有高柱效，但也會(huì)引起高阻力，需用高壓輸送流動(dòng)相，故又稱高壓液相色譜法[2]。液相色譜十分適合分離混合樣品中的各個(gè)組分，高效液相色譜法(HPLC)針對(duì)試樣提純目的更具有分離速度快，效率高和應(yīng)用范圍廣等優(yōu)越性[3]。目前，高效液相色譜法(HPLC)已在研究開(kāi)發(fā)和工業(yè)生產(chǎn)領(lǐng)域得到廣泛應(yīng)用[4-5]。
柱效是色譜柱對(duì)色譜中兩種物質(zhì)分離能力的大小。高效液相色譜法（HPLC）柱效測(cè)定的高低，不僅反映出填料性能，有時(shí)也反映出裝填技術(shù)的好壞。所以測(cè)定柱效無(wú)論對(duì)生產(chǎn)填料或預(yù)裝柱的生產(chǎn)者，還是對(duì)使用填料或預(yù)裝柱的色譜工作者來(lái)說(shuō)，都是很重要的。通過(guò)柱效的測(cè)定，生產(chǎn)者可以比較準(zhǔn)確的進(jìn)行質(zhì)量控制，色譜工作者可根據(jù)測(cè)定的柱效選擇合適的色譜柱和監(jiān)督色譜柱使用過(guò)程中是否被污染。不同的色譜柱，固然有不同的柱效；但同一根色譜柱，測(cè)定柱效使用的方法不同，例如所用的化合物、流動(dòng)相、流動(dòng)相流速、溫度、進(jìn)樣量、進(jìn)樣體積、半峰寬的測(cè)量等等不同，所得到的理論塔板數(shù)也不相同。當(dāng)然，可以對(duì)對(duì)于所測(cè)定的柱效，附上有關(guān)的實(shí)驗(yàn)條件，但是，若將柱效的測(cè)定方法趨于一致，測(cè)定條件大致相同，生產(chǎn)者和色譜工作者會(huì)更加方便。
一  實(shí)驗(yàn)部分
1  儀器和試劑
制備型高壓高效液相色譜柱（ID63×630mm）、動(dòng)態(tài)軸向加壓液壓站：聊城萬(wàn)合工業(yè)制造有限公司；制備高壓輸液泵：GLP3250；紫外—可見(jiàn)檢測(cè)器：UC-3292；Rheodyne3725i六通進(jìn)樣閥（配5ml定量環(huán)）；色譜工作軟件及電腦。高效液相色譜儀，高速離心機(jī)，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀。
二次重蒸水；正己烷，乙酸乙酯，苯，萘，乙苯（均為分析純?cè)噭?，使用前先?jīng)過(guò)整流處理再用孔徑為0.45μm的微孔濾膜過(guò)濾）。
2 試驗(yàn)方法
（1）柱效測(cè)試液的配制
準(zhǔn)確移取苯、萘、乙苯若干于10ml容量瓶中，用正己烷定容，過(guò)0.45μm微孔濾膜，即得色譜柱柱效測(cè)試液。
（2）色譜條件
流速；
進(jìn)樣體積；
柱溫：室溫；
檢測(cè)波長(zhǎng)：UV254nm；
流動(dòng)相：高效液相色譜（HPLC）中，可做流動(dòng)相的溶劑很多[6]，然而，日常工作中可有商業(yè)提供的溶劑卻很有限[7]。而且經(jīng)常使用二元或多元溶劑的混合物作為流動(dòng)相，以調(diào)節(jié)流動(dòng)相的極性，改變洗脫強(qiáng)度或流動(dòng)相的選擇性。本文僅作了一元流動(dòng)相正己烷和二元流動(dòng)相正己烷-乙酸乙酯（90:10）、正己烷-乙酸乙酯（80:20）的對(duì)比試驗(yàn)。
3 試驗(yàn)過(guò)程
按照上述色譜條件進(jìn)行測(cè)試，待系統(tǒng)平衡穩(wěn)定后，用色譜工作站采集色譜數(shù)據(jù)，同時(shí)記錄色譜數(shù)據(jù)文件名，用其“數(shù)據(jù)處理”系統(tǒng)處理數(shù)據(jù)文件并記錄色譜峰的保留時(shí)間tR和相應(yīng)色譜峰的半峰寬Y1/2。
二 結(jié)果與討論
色譜柱是高效液相色譜儀的重要組件，無(wú)論是在保證純化過(guò)程的穩(wěn)定性還是保證最終產(chǎn)物的安全性上，填充柱的制備和質(zhì)量認(rèn)證都是極為重要的步驟。柱效在衡量柱子裝填效果方面具有重要地位，通常用理論塔板數(shù)作為衡量指標(biāo)，理論塔板數(shù)越大，柱效越高，分離效果越好。由Martin和Synger首先提出的塔板理論推導(dǎo)出來(lái)的理論塔板數(shù)柱效計(jì)算公式，長(zhǎng)期以來(lái)被用于評(píng)價(jià)色譜柱，至今仍在延用[3]。

流動(dòng)相體系	實(shí)驗(yàn)柱效（N/m）
	萘	苯	乙苯
正己烷	405268	38356	39526
正己烷-乙酸乙酯（90:10）	41598	39645	40589
正己烷-乙酸乙酯（80:20）	43589	40569	42287

2 溫度
在高效液相色譜中，柱溫影響著溶質(zhì)擴(kuò)散系數(shù)和流動(dòng)相粘度[8]：隨著柱溫的升高，溶質(zhì)擴(kuò)散系數(shù)增大、流動(dòng)相粘度降低，從而對(duì)保留時(shí)間、選擇性產(chǎn)生影響，因此，柱溫影響著理論塔板數(shù)的大小。華東理工大學(xué)李篤信等[9]等研究了高溫液相色譜中溫度對(duì)柱效的影響，得出柱效和溫度的關(guān)系：H=a+bT+c/T（a、b、c為常數(shù)），升溫過(guò)程中可以得到板高的一個(gè)最小值，取得最佳柱效。但是，由于受有機(jī)溶劑沸點(diǎn)的限制，高效液相色譜中溫度可變化范圍很小，而且溫度升高，容易產(chǎn)生氣泡，若進(jìn)入柱子的流動(dòng)相預(yù)熱不足，會(huì)導(dǎo)致重復(fù)性比較差。由于這些原因，測(cè)定柱效的溫度建議采用室溫。
3 進(jìn)樣量和進(jìn)樣體積
高效液相色譜柱具有一定的飽和容量和最大進(jìn)樣體積，他們決定于化合物分子在固定相和流動(dòng)相中的平衡。一般來(lái)說(shuō)，隨著進(jìn)樣量的增大，柱效降低；當(dāng)進(jìn)樣量超出色譜柱的飽和容量時(shí)，柱效顯著降低。對(duì)于一定的樣品量，進(jìn)樣體積增大，柱效降低，當(dāng)超出色譜柱的最大進(jìn)樣體積時(shí)，柱效明顯減低，影響分離效果。對(duì)于色譜分析柱，所需要的進(jìn)樣量和進(jìn)樣體積都很小，遠(yuǎn)遠(yuǎn)小于色譜柱的飽和容量和最大進(jìn)樣體積，因此，進(jìn)樣量和進(jìn)樣體積對(duì)定性定量的色譜分析柱柱效影響不大。但進(jìn)樣量和進(jìn)樣體積對(duì)制備型色譜柱柱效測(cè)量有很大影響，應(yīng)注意不要超出色譜柱的進(jìn)樣飽和容量和最大進(jìn)樣體積?？傮w來(lái)說(shuō)，在色譜柱的線性容量范圍內(nèi)，進(jìn)樣量和進(jìn)樣體積對(duì)柱效的影響不明顯（見(jiàn)表2，流動(dòng)相為二元流動(dòng)相正己烷-乙酸乙酯（80:20），試樣為萘，溫度為室溫）。
 

進(jìn)樣量（g/5ml）	0.2	0.4	0.5	2	5
柱效(N/m)	44256	44249	43895	40256	36895
進(jìn)樣體積(ml/0.5g)	1	2	5	10	15
柱效(N/m)	44589	44289	43956	38852	35987

從上表可以看出，在一定的范圍內(nèi)，隨著進(jìn)樣量和進(jìn)樣體積的變化，理論塔板數(shù)值變化不明顯，但超出了這個(gè)范圍，柱效明顯降低。
4 流動(dòng)相流速
1956年荷蘭學(xué)者范·第姆特（Van Deemter）等人提出了速率理論[10]，表述了影響柱效的各種因素，提出了流動(dòng)相流速影響保留時(shí)間和色譜峰擴(kuò)展，并由速率方程（也成范·第姆特方程式）推出流速影響柱效總存在一個(gè)最佳流速。對(duì)于分析型色譜柱，根據(jù)各種經(jīng)驗(yàn)，建議采用1ml/min左右的流動(dòng)相流速。對(duì)于制備型色譜柱，一般與直徑的平方成正比，建議利用標(biāo)準(zhǔn)色譜柱[10]和經(jīng)驗(yàn)公式：
制備柱流速=（）2×分析柱流速
               =（）2×1
               =（）2
制備柱內(nèi)徑單位為mm。
5 半峰寬
峰寬是指峰兩側(cè)拐點(diǎn)處所作兩條切線與基線的兩個(gè)交點(diǎn)間的距離。半峰寬（p是—峰高一半處的峰寬。半峰寬的測(cè)量現(xiàn)在大都可以從工作站軟件中直接得到，影響不大。
6 填料
對(duì)于一些非預(yù)裝柱，還應(yīng)考慮填料，應(yīng)注意填料的生產(chǎn)廠家和生產(chǎn)批號(hào)。
三 結(jié)論
由以上實(shí)驗(yàn)及分析可以看出，影響柱效測(cè)定的因素是很多的。測(cè)定的方法不同，得到的柱效肯定不同，所以測(cè)得的柱效應(yīng)附上以上所有實(shí)驗(yàn)條件，否則只說(shuō)某一填料或柱子的柱效太過(guò)籠統(tǒng)，容易產(chǎn)生歧義。所以最好的辦法是使柱效測(cè)定方法趨于統(tǒng)一化，至少大體相同，這樣，對(duì)填料和柱子的評(píng)價(jià)有了共同語(yǔ)言，可以減少很多不必要的糾紛。并且，質(zhì)量控制也有了依據(jù)，用戶可以更好的了解產(chǎn)品的性能。
參考文獻(xiàn)
[1]  成都中醫(yī)學(xué)院編著. 中藥學(xué),上?？茖W(xué)技術(shù)出版社，1978,1,89，123
[2]  王志祥、莫芬珠、余國(guó)琮. 制備型液相色譜分離技術(shù)進(jìn)展,化工時(shí)代，1997，11（5），12-17
[3] 陳怡文，等. 有機(jī)儀器分析.長(zhǎng)沙：湖南大學(xué)出版社,1987.
[4]  Colin H. Analusis, 1998,（26）：M15-M17
[5]  祁彥（Qi Y）,黃駿雄（Huang J X）. 化學(xué)進(jìn)展（Progress in Chemistry）,2001:13（4）：294-302
[6]  L.R.Snyder,J.Chem,Sct. 1978;16:223
[7]  S.R.Bakalyar,Amerlcan Laboratory,1978:43
[8]  成洪達(dá)，李彤，張維冰?，F(xiàn)代科學(xué)儀器[J].2006,109：74-78
[9]  李篤信，蘭韜，王風(fēng)云等.高溫液相色譜中溫度對(duì)柱效的影響，第十七屆全國(guó)色譜學(xué)術(shù)報(bào)告會(huì)及儀器展覽會(huì)會(huì)議論文集：1150-1151
[10] 劉國(guó)詮，余兆樓編. 色譜柱技術(shù). 北京：化學(xué)工業(yè)出版社，2001
[11] 中華人民共和國(guó)機(jī)械行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)，JB-5226-91